幻灯片 1基因工程的原理
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幻灯片 2
什么叫基因工程？
基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。
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幻灯片 3复习回顾：
1、基因的概念：
2、基因对性状的控制：
目标要求：
1、明确基因工程的三种工具及其作用
2、基因工程的原理
3、基因工程的操作步骤
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幻灯片 4限制酶
限制性内切酶：
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幻灯片 5特点：
一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，
并且能在特定的位点上切割DNA分子。
专一性
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幻灯片 6
2、DNA连接酶——“分子缝合针”
DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来。
磷酸二酯键
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幻灯片 7
3、分子运输车——运载体
常用的运载体主要有两类：
1）细菌细胞质的质粒
2）噬菌体或某些动植物病毒
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幻灯片 8质粒的化学本质：
基本组成单位：
DNA
4种脱氧核苷酸
腺嘌呤脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸
胞嘧啶脱氧核苷酸、胸腺嘧啶脱氧核苷酸
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幻灯片 9作为载体的条件：
1.能自我复制
2.一个或多个限制性内切酶的酶切位点
3.有标记基因
4.对受体细胞无害
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幻灯片 10
基因拼接技术或DNA重组技术
生物体外
基因
DNA分子水平
人类需要的基因产物
剪切
→ 拼接
→ 导入
→ 表达
基因重组
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幻灯片 11三、基因工程的基本操作程序四部曲：
1）目的基因的获取
2）基因表达载体的构建
3）目的基因导入和筛选
4）目的基因的表达与鉴定
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幻灯片 12
以下是两种不同的限制酶切割形成的 DNA片段：
（1）——CTGCA
——G
（2）——G
——CTTAA
（4） G——
ACGTC——
（3）AATTC——
G——
你能用DNA连接酶将它们连接起来吗？
和 能连接； 和 能连接。
1
4
2
3
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幻灯片 13下图表示限制酶切割某DNA的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列及切点是（ ）
A．CTTAAG，切点在C和T之间
B．CTTAAG，切点在G和A之间
C．GAATTC，切点在G和A之间
D．CTTAAC，切点在C和T之间
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幻灯片 14
1、目的基因的提取方法
直接分离法
人工合成法
反转录法
根据已知的氨基酸序列合成DNA
：鸟枪法
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幻灯片 15----
幻灯片 162、基因表达载体的组成：
目的基因+启动子+终止子+标记基因
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幻灯片 17转化
方法
将目的基因导入
植物细胞
将目的基因导入
动物细胞
将目的基因导入
微生物细胞
农杆菌转化法
基因枪法
花粉管通道法
——显微注射法
——感受态细胞
常用的受体细胞：
大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。
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幻灯片 18筛选已导入重组基因的受体细胞的依据是？
标记基因是否表达
为什么要进行目的基因的检测和表达？
因为导入的目的基因不一定表达
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幻灯片 194、目的基因的检测和表达
个体水平
首先要检测：
其次要检测：
最后检测：
分子水平
转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因
目的基因是否转录出了mRNA
目的基因是否翻译成蛋白质
例如：一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后，是否赋予了植物抗虫或抗病特性，需要做抗虫或抗病的接种实验，以确定是否具有抗性以及抗性的程度。
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幻灯片 201.基因工程的原理、优点
2.工具
3.步骤
A 方法1. 2.
B 如何构建？
C 筛选的目的？方法？
D 检测的方法？表达的含义？
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